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在選擇ABI_7500熒光定量PCR儀時需要考慮哪些問題?
更新時間:2022-05-27   點擊次數(shù):1801次
     ABI_7500熒光定量PCR儀操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準確,從不常見設(shè)備變成分子生物學實驗室的基礎(chǔ)設(shè)備。隨著PCR技術(shù)的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。該儀器發(fā)展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區(qū)。
  
  在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時,為了確保實驗結(jié)果的精確性和準確性都要在實驗中使用ROX(一種熒光染料)或?qū)S玫腞eferencedye,這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來,真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個,而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠家的專用的熒光染料或試劑開放的,有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購買前確認熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要,不能單單只聽宣傳。
  
  考慮多重ABI_7500熒光定量PCR儀的通道數(shù)的時候也應(yīng)該從實驗室實際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因為多重PCR必須要對退火溫度進行優(yōu)化,在引物設(shè)計的時候就可能開始考慮能不能放在一個反應(yīng)體系內(nèi)進行反應(yīng),不同的反應(yīng)需要的退火溫度不同,不合適的退火溫度會降低擴增效率,放大非特異性擴增,甚至擴增不出來,它使實驗指數(shù)倍的復雜化了。臨床上因為有試劑廠家專門針對某些疾病開發(fā)研制的多重檢測試劑盒,才需要用到3、4、5通道的檢測;科研用的熒光定量因為設(shè)計探針麻煩,基本上都用染料法,基本上單通道就能滿足。
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